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双槽梯度PCR仪应该这样使用

更新时间:2022-01-21      点击次数:583
  双槽梯度PCR仪的反应原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性一退火(复性)--延伸三个基本反应步骤构成:
  ①模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时聚合酶链式反应间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;
  ②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至40~60℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;
  ③引物的延伸:DNA模板一引物结合物在DNA聚合酶的作用下,于72℃左右,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性一退火一延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
  双槽梯度PCR仪根据样品槽的不同还可分为空气浴型和金属样品槽型。前者样品管架在空气浴中,通过气流的变温实现PCR热循环;后者样品管放置在金属样品槽孔中,通过金属样品槽的变温实现PCR热循环。近年来,在各种方案基因扩增仪的基础上,通过结构改变又派生出各种新型的PCR仪。例如,为了防止样品管中试剂的挥发,在样品槽上加一热盖,形成了盖加热型PCR仪;为了进行原位杂交,设计能放置载玻片的样品槽,形成原位PCR仪;为了加速PCR反应、节省试剂、提高特异性,用毛细管代替离心管,形成了毛细管型快速PCR仪。
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