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迷你梯度PCR仪常用的五种分析方法

更新时间:2022-03-10      点击次数:471
  迷你梯度PCR仪的梯度温度控制是一项可有助于PCR中引物退火优化的功能。 梯度设定的目的是在模块之间实现变化的温度,通过每列之间≥2°C的间隔温度升降,使得可同时对于一系列的温度进行测试以获取引物退火温度。该技术的一种形式便是设计带有三个或更多分割金属模块的PCR仪,每一模块都具有独立的加热和冷却元件。 相比于梯度模块,该模块设计可带来活设置三种或更多不同温度的能力,以便使得每个独立的区域都能进行更好的温度控制,特别是在优化过程中。
  独立金属模块的绝热性阻止了模块之间的热交换。 这就可实现更为准确的模块温度控制,确保模块之间实现线性的温度变化。
  迷你梯度PCR仪分析方法:
  ·凝胶电泳分析:PCR产物电泳,EB溴乙锭染色紫外仪下观察,初步判断产物的特异性。PCR产物片段的大小应与预计的一致,特别是多重PCR,应用多对引物,其产物片断都应符合预评的大小,这是起码条件。
  ·琼脂糖凝胶电泳:通常应用1~2%的琼脂糖凝胶,供检测用。
  ·聚丙烯酰胺凝胶电泳:6~10%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离效果比琼脂糖好,条带比较集中,可用于科研及检测分析。
  ·酶切分析:根据PCR产物中限制性内切酶的位点,用相应的酶切、电泳分离后,获得符合理论的片段,此法既能进行产物的鉴定,又能对靶基因分型,还能进行变异性研究。
  ·分子杂交:分子杂交是检测PCR产物特异性的有力证据,也是检测PCR产物碱基突变的有效方法。
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