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双槽梯度PCR仪的常见问题及现场解决方案如下

更新时间:2022-05-16      点击次数:560
  双槽梯度PCR仪其实就是将多个的PCR反应放在一起做,不用一次一次的作很多次,可以很快的找出适合的退火温度,或者说可以在适合的退火温度下扩增出目的条带。除具标准PCR仪功能外,其梯度模块还能同时进行多个不同退火温度的PCR反应,在梯度模块上,可实现对梯度温度和梯度宽度等参数的调整,自由编程温度,梯度实现不同样品的退火温度并同时进行热循环。仅一次实验就能确定特定体系相应的退火温度。从而可在短时间内对PCR实验进行优化,大大提高PCR科研效率。
 
  双槽梯度PCR仪的常见问题及现场解决方案如下:
 
  1、梯度PCR仪在产物序列中引入了错误,这大多是由于聚合酶忠实性低或者循环数太多,这时需要使用带有校正活性的热稳定聚合酶,同时降低循环数。此外,四种dNTP的浓度不同也会出现该问题,此时应制备新的浓度相同的dNTP混合物。
 
  2、PCR跑胶,目的条带很亮,但是边沿不清楚,前后有拖尾现象。出现这样的问题,则需要进行细致的分析,因为引起该问题的可能很多。可先检查是否模板质量问题,如有降解等,模板应避免反复冻融。也有可能是抽提RNA时有污染,则需要重新抽提RNA。此外,也可能是非特异性扩增引发该问题,可提高退火温度,少循环次数。电泳缓冲液时间太长,ph值和盐离子浓度明显改变、电泳时电压太高、电泳液过久没换,电泳胶脏了等都可能引发该问题。如果不是由上述原因引起,则进一步检查加样量是否过大,制胶过程中胶孔是否制好,EB是否冲洗干净、模板中是否混有基因组DNA或蛋白等。也需考虑是否扩增的条件不合适。针对具体原因再采取相应的措施。
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