双槽梯度PCR仪的常见问题及现场解决方案如下

　　双槽梯度PCR仪其实就是将多个的PCR反应放在一起做，不用一次一次的作很多次，可以很快的找出适合的退火温度，或者说可以在适合的退火温度下扩增出目的条带。除具标准PCR仪功能外，其梯度模块还能同时进行多个不同退火温度的PCR反应，在梯度模块上，可实现对梯度温度和梯度宽度等参数的调整，自由编程温度，梯度实现不同样品的退火温度并同时进行热循环。仅一次实验就能确定特定体系相应的退火温度。从而可在短时间内对PCR实验进行优化，大大提高PCR科研效率。

 

　　双槽梯度PCR仪的常见问题及现场解决方案如下：

 

　　1、梯度PCR仪在产物序列中引入了错误，这大多是由于聚合酶忠实性低或者循环数太多，这时需要使用带有校正活性的热稳定聚合酶，同时降低循环数。此外，四种dNTP的浓度不同也会出现该问题，此时应制备新的浓度相同的dNTP混合物。

 

　　2、PCR跑胶，目的条带很亮，但是边沿不清楚，前后有拖尾现象。出现这样的问题，则需要进行细致的分析，因为引起该问题的可能很多。可先检查是否模板质量问题，如有降解等，模板应避免反复冻融。也有可能是抽提RNA时有污染，则需要重新抽提RNA。此外，也可能是非特异性扩增引发该问题，可提高退火温度，少循环次数。电泳缓冲液时间太长，ph值和盐离子浓度明显改变、电泳时电压太高、电泳液过久没换，电泳胶脏了等都可能引发该问题。如果不是由上述原因引起，则进一步检查加样量是否过大，制胶过程中胶孔是否制好，EB是否冲洗干净、模板中是否混有基因组DNA或蛋白等。也需考虑是否扩增的条件不合适。针对具体原因再采取相应的措施。