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宠物检测PCR技术中为什么要3次循环才能得到目的基因?

更新时间:2022-06-27      点击次数:3099
  宠物检测PCR是一种体外模拟自然DNA复制过程的核酸扩增技术,亦称为无细胞分子克隆技术。它是以待扩增的两条DNA链为模板,在一对人工合成的寡核苷酸引物的介导下,通过耐高温DNA聚合酶的酶促作用,快速特异地扩增出特定的DNA片断。
  反应时,首先在摩尔数大大过量的两段引物及四种dNTP参与下对模板DNA进行加热变性;随之,将反应混合液冷却到某一温度,这一温度可使引物与它的靶序列退火;后退火引物在DNA聚合酶作用下得以延伸。如此反复进行变性、退火此和DNA合成这一循环。由于一轮扩增的产物又充当下一轮扩增的模板,所以在这一周而复始的过程中每完成一个循环,就基本上使目的DNA产物增加一倍。这一指数反应的主产物是一段双链DNA,它的两个末端由寡核苷酸引物端来决定,而长度则取决于两引物间的距离。
  早期的PCR方法采用大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow片断催化退火的寡核苷酸引物进行延伸反应由于该酶会在进行DNA变性的温度下失活,所以在每一轮合成反应中都须重新加1份酶。并且在扩增较长模板是效果不够理想,产率较低有一些错配,导致产物大小不均。
  宠物检测PCR技术中为什么要3次循环才能得到目的基因?
  1、一个循环扩增出来的新片段很长很长。
  2、二个循环以新的长片段为模板进行,但新片段的一端是引物开头的,所以第二个循环得到的片段就是我们需要的长度,但只是一条链,所以还不能分离出目的基因。
  3、三个循环,当以第二个循环得到的新片段为模板时,因为这个片段的长度就是需要扩增的长度,当第三个循环完成时,这个片段是需要的长度,且是双链DNA,这就得到了需要的目的基因了。
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