实时荧光定量PCR(qPCR)是在普通PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程。在PCR反应早期,产生荧光的水平不能与背景明显地区别,而后荧光的产生进入指数期、线性期和平台期,可以在PCR反应处于指数期的某一点上来检测PCR产物的量,并且由此推断模板的含量,实时荧光定量PCR仪主要由荧光定量系统和计算机组成。荧光定量系统负责监测循环过程中的荧光信号,而与之相连的计算机则收集这些荧光数据。通过专门的实时分析软件,数据可以以图表的形式显示出来,便于研究人员进行分析。
实时荧光定量PCR仪以其高灵敏度、高特异性、高准确性和高速度的特点,被广泛应用于各种生命科学研究领域和临床诊断中。
基因表达分析:可以用来分析基因的表达水平,包括mRNA转录量的定量、差异表达基因的筛选以及研究基因调控机制等。这为基因功能研究提供了重要数据支持。
病原微生物检测:在病原微生物检测中具有高度灵敏度和特异性,可以快速、准确地检测微生物的存在和数量。这使其成为疾病诊断、传染病监测以及食品安全检测等领域的重要工具。
基因突变检测:可以检测DNA序列的变异和突变,包括单核苷酸多态性(SNP)、插入缺失(InDel)等。这些检测对于疾病遗传学研究、个体基因分型以及法医学鉴定等领域具有重要意义。
DNA定量分析:还可用于定量分析DNA样本的浓度和纯度,常用于核酸提取、质量控制以及实验前的标准化处理等。
病毒载量检测:实时荧光定量PCR也被广泛应用于检测病毒感染样本中病毒的载量,如HIV、HPV、流感病毒等。这有助于医学研究人员了解病毒感染的程度和传播动态。