程序降温盒使用经验分享

　　冻存细胞时要缓慢冷冻，程序降温，以提高细胞的存活率。目前普遍的做法是采用程序降温仪或程序降温盒，采用程序降温仪价格昂贵、操作繁琐，而程序降温盒在生物学实验室中广泛使用，是细胞冻存盒类产品的经典实验耗材之一。

　　程序降温盒包括盒盖、盒身和管槽，管槽置于盒身内，盒盖盖于盒身上且与盒身螺纹配合，还包括连接带，连接带一端与盒盖连接，另一端与盒身连接；本实用新型设置了连接盒盖与盒身的连接带，使盒盖与盒身不分离，减少了配对标记这一步骤，减少了操作程序，使用更加方便；同时，本实用新型出入超低温冰箱时，可手提连接带，减少了手的接触面积，减少或防止冻伤；另外，管槽与盒身螺纹配合，增加了密封度，防止了异丙醇挥发而导致的冻存效果变差。

　　程序降温盒使用经验分享：

　　经验1：我们实验室冻存盒平时放4度，需要冻细胞时直接拿出来用就可以了。第二天转移至液氮，贵重的细胞尽快转移，不然会影响复苏成活率的。一般是用5次就更换一下异丙醇。现在也有一些商品化冻存液可以直接丢进-80的，很方便，效果也不错的。

　　经验2：异丙醇的量是要保证的，不能低于表明的线，否则不能起到很好的程序性降温作用，我们是在4度放置，放了细胞后立马放到-80度冰箱，第二天再转移到液氮，效果很不错。异丙醇熔点：-87.9度的色透明具有乙醇气味的可燃性有毒液体。注意了有可燃性！急性毒性：口服-大鼠LD50：5840毫克/公斤；口服-小鼠LC50：3600毫克/公斤。刺激数据：眼睛-兔子100毫克/！请注意清理！

　　经验3：应该不可以把冻存盒放4°的，因为梯度降温的起始点是室温20°左右，所以从-80℃拿出来的冻存盒应该现在室温静置一段时间待其恢复到室温再使用。而其中的异丙醇应使用6~7此后更换一次，而且保证液体量达到刻度线，否则降温效果会受到影响。

　　经验4：冻存盒里的异丙醇一般是250ml，低于刻度了要加上，理论上是5次以后更换异丙醇，但是异丙醇对环境有害，我们可以多用几次，只是少了的时候要加满。还有冻存液里面的DMSO对细胞有毒性，尤其是室温的时候，所以冻存盒和冻存液先放4°，等把细胞用冻存液重悬好了放在冻存盒里，还放回4°，等到出细胞间的时候再拿到-80°里面保存。过夜再转入液氮。

　　程序降温盒这个梯度降温可大大提高细胞冻存的存活率，由于程序降温盒内存在100%浓度的异丙醇和泡沫内衬，因此程序降温盒也可以用于细胞复苏。