迷你梯度PCR仪的性能对于您和您的研究具有至关重要的作用。温度、变温速率和保持时间是影响PCR反应成功的关键参数。高性能PCR仪必须能够准确控制液体(反应)温度和保持时间,不受反应体积的影响。PCR仪对温度和保持时间的控制在PCR优化实验中具有更重要的作用。PCR仪必须在正常PCR和PCR优化运行过程中提供相同的性能。梯度温度控制是帮助用户进行PCR优化实验的特性之一,以便确定PCR实验方案的温度和保持时间,尽量减少实验次数。在理论上,真正的梯度应在均匀的金属加热模块上显示线性温度斜率。
迷你梯度PCR仪实验操作注意事项:
1.戴一次性手套,若不小心溅上反应液,立即更换手套;
2.使用一次性吸头,严禁与PCR产物分析室的吸头混用,吸头不要长时间暴露于空气中,避免气溶胶的污染;
3.避免反应液飞溅,打开反应管时为避免此种情况,开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅到手套或桌面上,应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面;
4.操作多份样品时,制备反应混合液,先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好,然后分装,这样即可以减少操作,避免污染,又可以增加反应的准确度;
5.加入反应模板,加入后盖紧反应管;
6.操作时设立阴阳性对照和空白对照,即可验证PCR反应的可靠性,又可以协助判断扩增系统的可信性;
7.尽可能用可替换或可高压处理的加样器,由于加样器容易受产物气溶胶或标本DNA的污染,建议使用可替换或高压处理的加样器。如没有这种特殊的加样器,至少PCR操作过程中加样器应该专用,不能交叉使用,尤其是PCR产物分析所用加样器不能拿到其它两个区;
8.重复实验,验证结果,慎下结论。