二维梯度PCR实验操作注意事项

　　二维梯度PCR其实就是将多个的PCR反应放在一起做，不用一次一次的作很多次，温度梯度PCR可以很快的找出适合的退火温度，或者说可以在适合的退火温度下扩增出目的条带。除具标准PCR仪功能外，其梯度模块还能同时进行多达12个不同退火温度的PCR反应，在梯度模块上，可实现对梯度温度和梯度宽度等参数的调整，自由编程12道温度，梯度实现不同样品的退火温度并同时进行热循环。仅一次实验就能确定特定体系相应的退火温度。从而可在短时间内对PCR实验进行优化，大大提高PCR科研效率。
 

　　二维梯度PCR实验操作注意事项：
 

　　1.戴一次性手套，若不小心溅上反应液，立即更换手套；
 

　　2.使用一次性吸头，严禁与PCR产物分析室的吸头混用，吸头不要长时间暴露于空气中，避免气溶胶的污染；
 

　　3.避免反应液飞溅，打开反应管时为避免此种情况，开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅到手套或桌面上，应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面；
 

　　4.操作多份样品时，制备反应混合液，先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好，然后分装，这样即可以减少操作，避免污染，又可以增加反应的准确度；
 

　　5.加入反应模板，加入后盖紧反应管；
 

　　6.操作时设立阴阳性对照和空白对照，即可验证PCR反应的可靠性，又可以协助判断扩增系统的可信性；
 

　　7.尽可能用可替换或可高压处理的加样器，由于加样器容易受产物气溶胶或标本DNA的污染，建议使用可替换或高压处理的加样器。如没有这种特殊的加样器，至少PCR操作过程中加样器应该专用，不能交叉使用，尤其是PCR产物分析所用加样器不能拿到其它两个区；
 

　　8.重复实验，验证结果，慎下结论。
 

　　二维梯度PCR应用领域：分子生物学、医学、食品工业、司法科学、生物技术、环境科学、微生物学、临床诊断、流行病学、遗传学、基因芯片、基因检测、基因克隆、基因表达等领域以聚合酶链式反应(Picymerase Chain Reaction，PCR)为特征的、以检测DNA/RNA为目的的各种病原体检测及基因分析。