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二维梯度PCR实验操作注意事项

更新时间:2022-09-20      点击次数:441
  二维梯度PCR其实就是将多个的PCR反应放在一起做,不用一次一次的作很多次,温度梯度PCR可以很快的找出适合的退火温度,或者说可以在适合的退火温度下扩增出目的条带。除具标准PCR仪功能外,其梯度模块还能同时进行多达12个不同退火温度的PCR反应,在梯度模块上,可实现对梯度温度和梯度宽度等参数的调整,自由编程12道温度,梯度实现不同样品的退火温度并同时进行热循环。仅一次实验就能确定特定体系相应的退火温度。从而可在短时间内对PCR实验进行优化,大大提高PCR科研效率。
 
  二维梯度PCR实验操作注意事项:
 
  1.戴一次性手套,若不小心溅上反应液,立即更换手套;
 
  2.使用一次性吸头,严禁与PCR产物分析室的吸头混用,吸头不要长时间暴露于空气中,避免气溶胶的污染;
 
  3.避免反应液飞溅,打开反应管时为避免此种情况,开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅到手套或桌面上,应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面;
 
  4.操作多份样品时,制备反应混合液,先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好,然后分装,这样即可以减少操作,避免污染,又可以增加反应的准确度;
 
  5.加入反应模板,加入后盖紧反应管;
 
  6.操作时设立阴阳性对照和空白对照,即可验证PCR反应的可靠性,又可以协助判断扩增系统的可信性;
 
  7.尽可能用可替换或可高压处理的加样器,由于加样器容易受产物气溶胶或标本DNA的污染,建议使用可替换或高压处理的加样器。如没有这种特殊的加样器,至少PCR操作过程中加样器应该专用,不能交叉使用,尤其是PCR产物分析所用加样器不能拿到其它两个区;
 
  8.重复实验,验证结果,慎下结论。
 
  二维梯度PCR应用领域:分子生物学、医学、食品工业、司法科学、生物技术、环境科学、微生物学、临床诊断、流行病学、遗传学、基因芯片、基因检测、基因克隆、基因表达等领域以聚合酶链式反应(Picymerase Chain Reaction,PCR)为特征的、以检测DNA/RNA为目的的各种病原体检测及基因分析。
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