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双槽梯度PCR仪该怎样设置梯度?

更新时间:2023-02-01      点击次数:459
  双槽梯度PCR仪通常有12种温度梯度,这样的仪器就叫梯度PCR仪。因为被扩增的不同DNA片段,其退火温度是不同的,通过设置一系列的梯度退火温度进行扩增,从而一次性PCR扩增,就可以筛选出表达量高的退火温度,进行有效的扩增。主要用于研究未知DNA退火温度的扩增,这样节约成本的同时也节约了时间。主要用于科研,教学机构。梯度PCR仪,在不设置梯度的情况下也可以做普通PCR扩增。具有双槽梯度的不多,领成具备此功能。
 
  双槽梯度PCR仪增加一个荧光信号采集系统和计算机分析处理系统,就成了荧光定量PCR仪。其PCR扩增原理和普通PCR仪扩增原理相同,只是PCR扩增时加入的引物是利用同位素、荧光素等进行标记,使用引物和荧光探针同时与模板特异性结合扩增。扩增的结果通过荧光信号采集系统实时采集信号连接输送到计算机分析处理系统得出量化的实时结果输出。把这PCR仪叫做实时二手热循环仪PCR仪(qPCR仪)。荧光定量PCR仪有单通道,双通道,和多通道。当只用一种荧光探针标记的时候,选用单通道,有多荧光标记的时候用多通道。单通道也可以检测多荧光的标记的目的基因表达产物,因为一次只能检测一种目的基因的扩增量,需多次扩增才能检测完不同的目的基因片段的量。
 
  双槽梯度PCR仪该怎样设置梯度?
 
  一般别的的步骤和普通PCR都一样,不同在于复性温度的设置,多数是先设定一个复性温度的范围,然后是该范围内的梯度数,(有的还有0.5和0.2微升EP管之分),PCR仪会很据这两个数据给出每个梯度数的具体温度,然后你根据这些温度选择接近你所希望的复性温度较接近的温度所在的孔的位置,将ep管插入这些孔即可。
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