荧光定量PCR的使用方法和用途

　　荧光定量PCR反应就是从RNA反转录至cDNA，然后通过PCR反应扩增cDNA的过程。Super一步法RT-PCR(AMV)试剂盒采用了一步反应法完成整个RT-PCR反应，即RNA-cDNA-PCR反应操作在同一反应体系中进行，反应过程中不需增加额外的步骤，就可完成整个RT-PCR反应，同时整个反应系统且含有电泳时所需要的试剂，可直接上样电泳。本试剂盒具有方便、简捷、灵敏度高、重复性好的特点，可适用于各种动、植物、病毒RNA的PCR检测。
 

　　荧光定量PCR使用注意事项：
 

　　1.平台效应：PCR不能进入平台期，出现平台效应与所扩增的目的基因的长度、序列、二级结构以及目标DNA起始的数量有关。故对于每一个目标序列出现平台效应的循环数，均应通过单独实验来确定。
 

　　2.防止DNA的污染：①采用DNA酶处理RNA样品；②在可能的情况下，将PCR引物置于基因的不同外显子，以消除基因和mRNA的共线性。
 

　　3.RNA提取试剂盒：目前试剂公司有多种RNA提取试剂盒、cDNA试剂盒、PCR试剂盒以及RT-PCR试剂盒出售，其原理基本相同，但操作步骤不一。如果使用试剂盒，具体操作步骤请参照试剂盒说明书。
 

　　荧光定量PCR的使用方法和用途：
 

　　1.支原体常规PCR检测试剂盒(一步法)
 

　　1)适合科研单位检测，或单位内检，用PCR法检测细胞或其他生物基质。
 

　　2) 比药典操作标准合并了一步，(将内控对照试剂预先混合在PCR mix试剂中)，操作更简洁。
 

　　3)样本量为2μl，灵敏度为20个基因组拷贝/反应。结果准确。
 

　　2.支原体常规PCR检测试剂盒(经典法，不含Taq酶)
 

　　1) 符合欧洲药典、中国药典要求，更适合细胞治疗，CAR-T，抗体药、疫苗等临床项目申报和质检。
 

　　2)样本需先做DNA抽提。抽提后样本加入量为10μl。
 

　　3)试剂盒中不含Taq酶，需另外购买。
 

　　4) 厂家可协助完善方法验证步骤。